原理:染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)是研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)或組蛋白特異性修飾位點(diǎn)的研究。基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過(guò)免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA片段,通過(guò)對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè),從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
應(yīng)用:
ChIP方法能研究DNA甲基化、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、組蛋白修飾和轉(zhuǎn)錄因子的協(xié)同結(jié)合,或者從預(yù)測(cè)的靶基因中確定直接的靶位點(diǎn)。ChIP技術(shù)和其它分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合(例如普通PCR,實(shí)時(shí)定量PCR,基因克隆,DNA微陣列或者更直接的高通量測(cè)序技術(shù)),已經(jīng)被用于確定轉(zhuǎn)錄因子和DNA的相互作用或轉(zhuǎn)錄因子新的基因組靶位點(diǎn)。
最初,ChIP應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、酵母、果蠅染色質(zhì)的研究上;后來(lái),被應(yīng)用在相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和修飾后組蛋白位置等方面的研究方面。ChIP技術(shù)還能用于研究蛋白和蛋白之間的相互作用,如通過(guò)酵母雙雜交和ChIP證實(shí)了DELLA蛋白與PIF3蛋白之間的相互作用。
隨著ChIP技術(shù)的進(jìn)一步完善,它必將會(huì)在基因表達(dá)調(diào)控研究中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。而由于ChIP實(shí)驗(yàn)涉及的步驟多,結(jié)果的重復(fù)性較低,因此研究人員對(duì)ChIP實(shí)驗(yàn)過(guò)程的每一步都應(yīng)設(shè)計(jì)相應(yīng)的對(duì)照,而且對(duì)結(jié)果的分析也需要有一定的經(jīng)驗(yàn)。對(duì)剛剛開(kāi)始使用ChIP技術(shù)的實(shí)驗(yàn)新手,選用成熟的商品化試劑盒和相關(guān)的技術(shù)服務(wù)可達(dá)到事半功倍的效果。
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經(jīng)典文獻(xiàn):
1.Barski, A.et al. High-resolution profiling of histone methylations in the human genome, Cell.2007. 129, 823–837.
2.Carroll, et al. Genome-wide analysis of estrogen receptor binding sites, Nature Genetics.2006. 38, 1289–1297.
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服務(wù)模式:
客戶(hù)提供:
① 活細(xì)胞:培養(yǎng)細(xì)胞至60-80%密度,然后加滿(mǎn)培養(yǎng)基寄給公司;
② 基因信息、物種信息及ID。
③ 一抗。
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公司提供:
實(shí)驗(yàn)報(bào)告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)。
公司名稱(chēng):上海澤恒生物科技有限公司
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